Spezialfrage zu SDS mit KOH

Hallo Mikroskopier-Freunde,
ich habe gerade eine spezielle Frage auf die ich keine Antwort finden kann.
Ich weiß dass wenn man ein Präparat in KOH anlegt keinesfalls mit SDS arbeiten darf (z.B. mit Kongo/SDS färben) da eine Ausfällung stattfindet.
(SDS reagiert mit KOH)
Nun die Frage:
Wenn man ein Exsikkat in KOH3% quillt folgt darauf ja eine Präparatwäsche mit destilliertem Wasser. Das heißt es ist nicht mehr viel KOH vorhanden. Darf man dann mit SDS arbeiten?

Ich habe einen Test dazu gemacht, der mir eine Antwort gab. Ich bin mir aber noch nicht 100% sicher ob meine Antwort sitmmt.
Ich verrate Euch was ich heraus fand im Anschluss.
Was meint Ihr?
Beste Grüße
Dieter

Danke Pablo,
was Du schreibst unterstützt das Ergebnis meines Tests.

> Dürfen darfst du alles. Ist nur halt die Frage, ob das dann auch ein schönes Präparat wird.

Ja, ich weiß was Du meinst. Aber ich will Euch ja immer dufte Bilder zeigen.... Deshalb suche ich nach dem "Stein der Weisen"

Beste Grüße
Dieter

Zitat von Karl  W

Du kannst besser Kongo/NH3 verwenden, wenn Du in KOH gequollen hast.

Danke Karl, ja das wusste ich schon von Andreas. Aber ich wollte speziell wissen ob nach dem Auswaschen SDS auch ausfällt.
Gar nicht letal ist übrigens Kongo/Wasser.

Zitat von Tomentella

am Besten verträgt sich KOH mit Phloxin. Da flockt nichts aus und die Strukturen sind sehr gut zu sehen. Aber du mußt etwas vorsichtig sein, wenn es auf die Haut kommt. Es geht drei Tage lang nicht weg.

Danke auch Dir Frank, aber Phloxin B ist ein Plasma-Färbemittel, es färbt also das Zellinnere besonders gut an. Kongorot ist hingegen ein Zellwandfärbemittel und färbt besonders gut die Zellwände an. Das sind zwei ganz unterschiedliche Anwendungsbereiche, die man nicht miteinander verwechseln darf.
Porlings-Fans greifen oft zu Phloxin B um generative Hyphen von den Skeletthyphen optisch abzugrenzen. Der Grund dafür ist dass sie Skeletthyphen eben kein Plasma enthalten. Aber das wirst Du sicher besser wissen als ich - es ist eher für die Mitleser hier gedacht als Info.
Aber auch aus den USA ist eine weit verbreitete Phloxin-Färbemethode bekannt. Falls Interesse besteht kann ich die gerne mal vorstellen.
Diese Methode habe ich auch schon getestet - aber keine Bilder gemacht da ich sie eher nicht verwenden werde.
Beste Grüße
Dieter

Zitat von Ingo  W

Hallo Dieter!

Zitat

Aber auch aus den USA ist eine weit verbreitete Phloxin-Färbemethode bekannt. Falls Interesse besteht kann ich die gerne mal vorstellen.

Na du stellst Fragen. Natürlich ist das interessant.

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Gerne Ingo,

Von den Amerkanischen Freunden wird Phloxin B als 1%ige Lösung in Wasser oft benutzt. Wie oben schon gesagt lässt er also die Zellwände ungefärbt. Auch die Septen bleiben ungefärbt. Das Zytoplasma (oder Cytoplasma) also das innerhalb der der Zellmembran liegende wird aber typisch Phoxin-Pink eingefärbt. Die Amerikanischen Freunde (bin dort ja auch im Forum) wende für Exsikkate häufig folgende Reihenfolge an: KOH 2% > Phloxin B 1% > Glycerin-HCl. Also quellen in KOH 2%, hinzufügen von einen Tropfen Phloxin B 1%ige Lösung > absaugen > dann in Untersuchungsmedium überführen. Das Untersuchungsmedium ist leicht saueres Glyzerin/Wasser-Gemisch - häufig 50ml Glyzerin, 50 ml Wasser, 0,25 ml Salzsäuze konzentriert.
Wenn ich das wieder mal mache schicke ich Euch gerne Bilder davon.

Zitat von Ingo  W

Genau! Nur wer mit dem ganzen Zeug etwas rumspielt und probiert, kriegt was neues raus.

Ich bin der Experimentrierer schlechthin.
Beste Grüße
Dieter

OK, vielen Dank an alle.
Nun die Auflösung meines Tests:
Ich habe folgendes festgestellt:
KOH nicht ausgewaschen: starke Ausfällungen
KOH schlampig ausgewaschen: immer noch Ausfällungen aber wenig
KOH mehrfach penibel ausgewaschen: Ich bin nicht sicher aber ich denke: Immer noch geringe Ausfällungen, sehr winzig aber vorhanden. Ich war mir nicht sicher, ob das Ausfällung sind, denke aber schon.
Die ursprüngliche Frage für mich war: kann ich mir eine Reagenzie sparen? Antwort: Nein besser nicht.
Beste Grüße
Dieter